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    产品中心

    kamiyabiomedical KT-470

    • 型   号:
    • 时   间:2019-04-16
    • 价   格:

    kamiyabiomedical KT-470
    小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验
    Mouse Cardiac Troponin-I ELISA
    用于小鼠血浆肌钙蛋白I的定量测定。
    货号 KT-470
    仅供研究使用
    产品
    K-分析小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验是一种酶免疫分析法,用于定量测定心肌
    小鼠血浆肌钙蛋白-I。仅供研究使用。

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    kamiyabiomedical KT-470说明书

    小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验

    Mouse Cardiac Troponin-I ELISA

    用于小鼠血浆肌钙蛋白I的定量测定。
    货号 KT-470
    仅供研究使用

    kamiyabiomedical KT-470产品
    K-分析小鼠心肌肌钙蛋白-I酶联免疫吸附试验是一种酶免疫分析法,用于定量测定心肌
    小鼠血浆肌钙蛋白-I。仅供研究使用。

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    介绍
    心肌肌钙蛋白-I(ctni)是调节肌肉收缩的肌钙蛋白复合物的组成部分。心脏损伤后,CTNI
    被释放到血液中。因为它在心脏中有特殊的表达,所以它是心脏损伤的一个极好的生物标志物。在
    人CTNI水平在受伤后12-24小时达到峰值,2-6天内恢复到基线水平。在小鼠中,水平早在1
    1-3天内恢复正常。
    原理
    本试验用于血浆样品。酶联免疫吸附试验使用两种不同的抗体,它们识别相对
    CTNI上的蛋白酶抗性表位。一种用于固相固定(微量滴定井)。第二个是共轭的
    对辣根过氧化物酶(HRP)进行检测。首先用三体积的血浆稀释血浆样品。
    稀释剂。然后将校准器和稀释样品与HRP共轭物在微量滴定池中培养1小时。这个
    结果CTNI分子夹在固定和检测抗体之间。洗井到
    去除未结合的HRP共轭物。加入TMB,孵育20分钟。如果存在CTNI,则形成蓝色。颜色
    通过添加停止溶液停止显影,将颜色变为黄色,并在450 nm处测量吸光度。
    CTNI的浓度与吸光度成正比,由校准曲线得出。
    组件
    •防CTNI涂层板(12 x 8孔条)
    •CTNI库存校准器(冻干)
    •校准器稀释剂,25毫升
    •血浆稀释剂,25 ml
    •HRP共轭物,11 ml
    •20倍洗涤液,50毫升
    •TMB溶液,11毫升
    •停止溶液,11毫升

    所需但未提供的材料
    •移液器和吸管头
    •蒸馏水或去离子水
    •聚丙烯或玻璃管
    •涡流搅拌机
    •吸水纸或纸巾
    •培养皿/摇床
    •板垫圈
    •能够测量450 nm吸光度的读板器。
    •曲线拟合软件
    洗涤液准备
    洗涤液作为20倍的储备提供。使用前,用950毫升蒸馏水稀释瓶子(50毫升)的内容物。
    或去离子水。
    校准器准备
    1。按照小瓶标签上的详细说明,用去离子水或蒸馏水重新配制冻干的CTNI储备。轻轻搅拌直到溶解的
    2。将7根聚丙烯管标记为10、5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml。
    三。在标记为10 ng/ml的试管中,移液管446.1微升校准稀释液。然后加入53.9μl的原料,轻轻搅拌。这个
    提供10 ng/ml校准仪。
    4。用移液管将250微升校准稀释液移入标有5、2.5、1.25、0.625、0.313和0.156 ng/ml的试管中。
    5。通过将250μl的10 ng/ml校准器与250μl的稀释剂在管中稀释和混合,制备5 ng/ml校准器。
    标记为5 ng/ml。同样,通过两倍串联稀释准备剩余的校准仪。
    重组后的CTNI储备应在使用后立即冷冻。冷冻时保持稳定或至少1
    -20°C时为一个月,-70°C时为6个月。使用后丢弃工作校准仪。
    样品采集与制备
    血浆(EDTA、柠檬酸盐或肝素)应在血液采集后尽快制备,并在4°C下保存。
    应同样处理样品(即所有样品的储存时间和温度应相同)。中频等离子体
    样品不能在采集后4小时内进行分析,应在-70°C下冷冻,使用前仅解冻一次。
    我们建议对样品进行一式两份的分析。分析前,血浆样品应稀释四倍
    血浆稀释剂。这可以很容易地通过将100μl的每个血浆样品与300μl的血浆稀释剂混合
    聚丙烯微型离心管。
    一般说明
    1。所有试剂在使用前应达到室温。
    2。解冻后,校准器稀释剂中可能会出现沉淀物。应通过离心法去除沉淀物。
    在台式离心机中以约3000转/分的转速运行5分钟。使用干净的上清液。
    三。在完全理解
    指导并遵守良好的实验室惯例。
    4。清洗程序至关重要。洗涤不足将导致精度差和吸光度读数错误升高。
    5。实验室温度会影响吸光度读数。我们的酶联免疫吸附测定试剂盒是用设置在
    150转/分和25°C。在较低温度下进行分析会导致吸光度值较低。

    测定程序
    1。将所需数量的8孔条固定在支架中。未使用的板条应存放在重新密封的袋子中
    4°C的干燥剂,以备将来使用。
    2。在每个孔中添加100μl的HRP共轭物。
    三。向井中注入100微升校准仪和稀释样品(我们建议校准仪和样品试运行
    复制品)。
    4。在150转/分和25°C的摇板机上培养1小时。
    5。使用平板垫圈(400μl/孔)排空并用1X洗涤液清洗5个微量滴度孔。
    6。在吸水纸或纸巾上用力敲打油井,清除所有残留的液滴。
    7。向每个孔中分配100μl TMB。
    8。在150转/分和25°C的轨道式微型平板振动筛上培养20分钟。
    9。20分钟后,通过向每个孔中添加100μl的停止溶液来停止反应。
    10。轻轻混合。务必确保所有蓝色变为黄色。
    11。在5分钟内用平板阅读器读取450纳米的吸光度。
    计算结果
    1。使用曲线拟合软件,通过绘制校准器的吸光度值与对数10的关系来构建校准曲线。
    浓度。
    2。将校准曲线拟合为四参数逻辑回归(4pl)方程(x轴=log10浓度),并确定
    样品的浓度(导出反对数)。
    三。将导出浓度乘以稀释系数,以确定原始样品中的实际浓度。
    4。如果A450值超出校准曲线,应适当稀释样品并重新测试。如果进一步稀释
    需要时,新鲜解冻的血浆样品应先用三体积的血浆稀释剂(4倍稀释)稀释。这个
    然后用校准器稀释剂稀释所得混合物。
    典型校准曲线
    典型的校准曲线如下所示。这只是为了说明。必须为每个实验生成校准曲线。

    存储
    将冻干后的原料储存在-20°C或以下。试剂盒的剩余部分应储存在4°C,微量滴定板应
    放在装有干燥剂的密封袋中。自购买之日起,套件将保持稳定6个月。

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